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测定意义
TH位于线粒体的内膜上,又称为呼吸电子传递链复合体六,催化NADH+NADP+和NAD++NADPH 相互转化。催化正向反应称为TH-1。线粒体NADH含量增加时会导致线粒体膜的 H+电化学梯度升高,因而促进了电子传递链上ROS的产生。TH-1促进NADH转换为NADPH,从而提高线粒体的抗氧化能力。
测定原理
NADH和NADPH均在340nm有特征吸收,因此TH催化的转氢反应不能导致340nm吸光度发生变化。用人工合成底物3-乙酰吡啶腺嘌呤二核苷酸磷酸(APADP +)替代NADP +,TH-1催化APADP+还原生成的APADPH在375nm有特征光吸收,因此通过测定375nm光吸收增加速率,来计算TH-1活性。
试剂的组成和配制
试剂一:液体 100mL×1 瓶,-20℃保存;
试剂二:液体 50mL×1 瓶,-20℃保存;
试剂三:液体 18mL×1 瓶,4℃保存;
试剂四:粉剂×1 支,-20℃保存;
试剂五:粉剂×1 支,-20℃保存;