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提取液:液体 70mL×1 瓶,4℃保存; 试剂一:液体 40mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存;临用前加入 20mL 提取液充分溶解备用;
试剂三:粉剂×2 支,4℃保存;用时每支加 1mL 双蒸水充分溶解备用;
试剂四:粉剂×2 支,-20℃保存;用时每支加 500μL 双蒸水充分溶解备用。
工作液:在 15mL 试剂二中加入 2mL 试剂三和 1mL 试剂四,可以根据比例现用现配。
ME 广泛存在于微生物、培养细胞、动物和植物胞浆中,尤其在植物组织中活性较高。ME 催化苹果酸氧化脱羧的可逆反应,产生丙酮酸和 CO2,以及伴随 NAD(P)+的还原反应,是苹果酸代谢的关键酶。ME 活性与生物合成和抗氧化密切相关。近年来植物 ME 活性测定较多,已经成为抗氧化研究的热点。根据辅酶专一性和对底物特异性的不同,可将 ME 分为 NAD-ME(EC1.1.1.38)和NADP-ME(EC1.1.1.40)。
NADP-ME 催化 NADP+还原成 NADPH,在 340nm 下测定 NADPH 增加速率。